2024年安(ān)捷倫Seahorse XF 技(jì )術培訓會在深圳灣實驗室圓滿舉行

​活動介紹
 
2024年6月18日，博興生物(wù)邀請安(ān)捷倫細胞分(fēn)析事業部在深圳灣實驗室平台部舉辦(bàn)了2024年深圳第一場Seahorse XF 專場培訓會活動，這也是在深圳辦(bàn)的第二場Seahorse XF 專場培訓，此次活動是基于對深圳區(qū)域用(yòng)戶進行售後回訪收集反饋信息以及綜合當前Seahorse XF的使用(yòng)情況而展開的，此次活動旨在給客戶提供一個線(xiàn)下面對面溝通交流的機會，幫助客戶更加全面深入的了解Seahorse XF細胞能(néng)量代謝(xiè)的技(jì )術原理(lǐ)以及其應用(yòng)領域。
 
活動現場
 
此次培訓會安(ān)捷倫細胞分(fēn)析應用(yòng)專家林鶴鳴分(fēn)享了Seahorse XF 技(jì )術的原理(lǐ)、應用(yòng)介紹、數據分(fēn)析處理(lǐ)及數據歸一化的理(lǐ)論部分(fēn),最後在儀器前進行了實際操作(zuò)演示。
安(ān)捷倫 Seahorse XF 技(jì )術可(kě)實時進行功能(néng)性活細胞代謝(xiè)分(fēn)析，更直接地測量以及更深入地了解細胞過程。Seahorse XF 技(jì )術通過測量細胞代謝(xiè)驅動因素的關鍵指标簡化數據解析，并提供試劑盒和檢測等一站式解決方案，簡化工(gōng)作(zuò)流程。進一步了解研究人員如何在疾病建模、表型分(fēn)析、靶标鑒定與驗證、作(zuò)用(yòng)機制以及先導化合物(wù)發現中(zhōng)利用(yòng)細胞代謝(xiè)能(néng)量分(fēn)析。

 

 

◀合影▶

 

此次培訓會吸引了約30名(míng)來自多(duō)個單位的用(yòng)戶老師參加，按照慣例，我們在會後進行了合影留念，此次培訓會至此就告一段落了，但我們的服務(wù)遠(yuǎn)沒有(yǒu)結束，有(yǒu)疑問歡迎咨詢博興生物(wù)技(jì )術支持。感謝(xiè)安(ān)捷倫應用(yòng)專家親臨現場為(wèi)大家帶來如此專業的技(jì )術培訓。感謝(xiè)深圳灣實驗室平台提供培訓場地。感謝(xiè)各位老師撥冗前來參會學(xué)習。我們下期再會!!!
 
關于Seahorse數據歸一化
 
問;
為(wèi)什麽需要數據歸一化
答(dá)：
功能(néng)生物(wù)數據的歸一化是原始數據展示和後續分(fēn)析工(gōng)作(zuò)流程中(zhōng)的關鍵因素，以确保對結果的準确一緻的解析。
Seahorse XF 代謝(xiè)分(fēn)析在這方面也是如此，實驗需要進行某種形式的歸一化。無論是比較不同的細胞類型、基因修飾還是化合物(wù)處理(lǐ)，都必須根據共同的參數将數據歸一化以便正确比較。Seahorse XF 可(kě)在包括細胞數、基因組 DNA 和總細胞蛋白質(zhì)的多(duō)個參數層面進行歸一化。本文(wén)主要介紹使用(yòng)細胞數（或細胞數的替代參數）來歸一化 XF 速率數據（OCR、ECAR、PER）的方法。
01貼壁細胞數據歸一化方法
通過 Cytation 采集的圖像中(zhōng)的熒光标記細胞核來測量每孔細胞數，此方法集成了XF 技(jì )術與 Cytation 細胞成像分(fēn)析儀。
XF 成像和歸一化系統的典型工(gōng)作(zuò)流程如下：

具(jù)體(tǐ)請參考5994-0022ZHCN_Normalization App Note.pdf.(agilent.com.cn)
 

 

如圖 1A 所示，OCR 和 ECAR 随接種密度成比例增加。完成 XF 分(fēn)析後，通過 XF 成像和細胞計數軟件采集熒光圖像并計數，如圖 1B 所示。圖 1C 顯示了歸一化後的數據，其中(zhōng)将代謝(xiè)速率除以軟件計數得到的細胞數。在應用(yòng)細胞計數歸一化因子後，OCR 和 ECAR 動力學(xué)曲線(xiàn)都發生重疊，特别是細胞加寡黴素和 FCCP 之前的基礎速率。因此，數據歸一化可(kě)以鑒定與細胞密度差異相關的真實生物(wù)學(xué)變化。如圖 1C 所示，FCCP 對 OCR 的影響随細胞密度而變化，而寡黴素導緻的 ECAR 升高不受細胞密度影響。
02 T 細胞等懸浮細胞的歸一化方法
懸浮細胞由于細胞核尺寸小(xiǎo)，且造血來源的細胞不能(néng)有(yǒu)效地吸收Hoechst熒光染料，在使用(yòng)進行熒光成像背景對比度較差，會影響計數的準确性。而無标記細胞成像計數技(jì )術，隻有(yǒu)在亞彙合細胞密度下計數才可(kě)靠，而 Seahorse XF 方案通常建議需要接近完全的彙合下進行檢測分(fēn)析，因此通過熒光成像或無标記成像方式進行細胞計數的方法均不太适合。采用(yòng)單細胞統計計數原理(lǐ)的流式細胞儀，來實現對懸浮細胞的計數就成為(wèi)首選方法。因此，我們建議采用(yòng)安(ān)捷倫的NovoCyte流式細胞儀進行活細胞計數，以達到 Seahorse XF 分(fēn)析平台進行數據歸一化的要求。
 
Seahorse XF與NovoCyte流式細胞儀進行數據歸一化的典型工(gōng)作(zuò)流程如下:

 

安(ān)捷倫 NovoCyte 流式細胞儀提供了一種簡單的解決方案，無需對流體(tǐ)系統進行複雜的校準或使用(yòng)參比微球，并且樣品之間的殘留最少。NovoCyte使用(yòng)小(xiǎo)樣品體(tǐ)積，提供總細胞和活細胞的準确細胞計數。該方法允許在接種前調整細胞密度，以防初始懸浮密度超出推薦範圍。該工(gōng)作(zuò)流程還對最終懸浮液計數，該活細胞計數用(yòng)于歸一化接種闆。
 

歸一化設備推薦

 Cytation 系列成像儀

Cytation 系列細胞成像儀可(kě)提供放大倍數高達 60 倍的熒光和高對比度明場成像。XY 導軌、聚焦、曝光、圖像采集和 LED 強度均為(wèi)全自動設置，簡便易用(yòng)。BioTek 功能(néng)強大的 Gen5 軟件可(kě)以無縫采集用(yòng)于定量發布的數據，無需進行大量培訓。溫度控制在 45 °C，振蕩采用(yòng)标準模式，可(kě)選 CO₂/O₂ 控制和注射器。Cytation 獨特的專利設計提供了定量的表型細胞圖像信息和出色的定量數據。