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微液滴數字PCR平台
獨特的産(chǎn)品優勢
1加樣體(tǐ)積可(kě)調 加樣體(tǐ)積在20-50μL内可(kě)調,更多(duō)加樣量,意味着更高靈敏度
2樣品數量靈活 每張芯片可(kě)處理(lǐ)1 -8個樣本,靈活可(kě)調,節省試劑耗材
3微滴數多(duō) 30μL樣本可(kě)制備約5萬個均一穩定的納升級液滴,線(xiàn)性範圍廣,為(wèi)0-30萬拷貝/樣本。
4微滴無需轉移 全封閉體(tǐ)系,操作(zuò)簡單,微滴生成後無需轉移,減少微滴損失
5封閉檢測 檢測時機器封閉運行,确保PCR産(chǎn)物(wù)不暴露在空氣中(zhōng),防止氣溶膠污染和樣本損失,預防假陽性
6單獨加樣 每個樣本獨立加樣控制,避免樣本間交叉污染
7信噪比高 相比成像方法,基于PMT進行信号檢測,容易判讀,結果準确
檢測流程
液滴制備(5分(fēn)鍾)+ PCR擴增(1.5小(xiǎo)時)+ 檢測分(fēn)析(25分(fēn)鍾)= 2小(xiǎo)時
數字PCR十大應用(yòng)
1基因表達差異研究
數字PCR可(kě)以提供比實時熒光定量PCR更精(jīng)确的基因差異表達研究,尤其對于那些靶基因表達差異微小(xiǎo)的情況,如:mRNA、microRNA、 IncRNAs等的表達分(fēn)析;等位基因的不平衡表達;單細胞基因表達分(fēn)析;外泌體(tǐ)核酸分(fēn)子定量分(fēn)析等
2低豐度DNA模闆分(fēn)子的精(jīng)确定量
由于絕大部分(fēn)微液滴中(zhōng)隻含單個或不含模闆分(fēn)子,使得低豐度DNA模闆分(fēn)子的擴增不受高豐度模闆分(fēn)子擴增的競争抑制,與此同時,樣本中(zhōng)可(kě)能(néng)存在的抑制劑也在分(fēn)配到微液滴的過程中(zhōng)進行了相對稀釋,作(zuò)用(yòng)于單個微液滴内模闆擴增的抑制劑數量大幅降低,從而提高PCR擴增對抑制劑的耐受程度,因此可(kě)應用(yòng)于諸多(duō)臨樣本(如血液、尿液、糞便、痰液、胸腹水、 腦脊液等)中(zhōng)痕量核酸标記物(wù)的檢測。一般而言, 定量PCR的檢測靈敏度約在1%, NGS的靈敏度可(kě)達到1%,而數字ECR的檢測下限可(kě)輕松實現0.01%
3拷貝數變異(CNV)研究
數字PCR直接讀取陽性信号,通過泊松分(fēn)布校正得到目标基因的絕對拷貝數,為(wèi)拷貝數變異的研究提供了絕對的檢測精(jīng)度。采用(yòng)數字PCR能(néng)夠有(yǒu)效對二代測序(NGS)和微陣列比較基因組雜交(aCGH)等實驗結果進行驗證,并具(jù)有(yǒu) 檢測周期短、成本低、樣本通量高等特點
4甲基化含量鑒定
傳統的亞硫酸氫鹽處理(lǐ)後的克隆測序法、抗體(tǐ)檢測法、定量PCR檢測法等受限于方法學(xué)的問題,不能(néng)獲得甲基化程度的精(jīng)确定量,而數字PCR 系統通過對樣本的微液滴處理(lǐ)及目标分(fēn)子的絕對拷貝數定量,為(wèi)甲基化程度的精(jīng)确定量檢測提供了一種可(kě)靠的技(jì )術
5二代測序輔助建庫
目前靶向測序建庫方法包括擴增子方法,在均相溶液中(zhōng),當擴增引物(wù)增加時,由于擴增引物(wù)之間的相互作(zuò)用(yòng),從而影響擴增的效率;如果将其分(fēn)散到大量微液滴中(zhōng)擴增,将可(kě)大大降低引物(wù)間相互作(zuò)用(yòng),提高擴增效率。同時還可(kě)以實現對于少量模闆的有(yǒu)效擴增,得到更多(duō)的有(yǒu)效測序數據
6 CRISPR-Cas9基因編輯結果驗證
CRISPR-Cas9技(jì )術的發明,是基因編輯技(jì )術的 一大突破,但如何驗證實驗是否成功,仍需要 高靈敏度的檢測方法,數字PCR技(jì )術可(kě)以滿足這一需求。Broad研究所張鋒團隊發明了以 CRISPR為(wèi)基礎的SHERLOCK技(jì )術可(kě)以對核酸 進行高靈敏度的定性檢測,但精(jīng)确定量評估時 仍采取了數字PCR進行确認
7無創産(chǎn)前篩查
唐氏綜合征、地中(zhōng)海貧血或胎兒遺傳性耳聾基因檢測等,目前無創檢測标本來源主要為(wèi)孕婦 血液,檢測胎兒DNA會受到母體(tǐ)DNA的幹擾, 依靠數字PCR可(kě)提高檢測準确性。對比NGS, 數字PCR技(jì )術可(kě)以提高工(gōng)作(zuò)效率、降低檢測成本
8微生物(wù)(病毒、細菌等)的檢測
疾病預防控制中(zhōng)心、出入境檢驗檢疫局系統的實驗室可(kě)以将基于TaqMan探針法的定量PCR體(tǐ)系無縫地轉移到數字PCR上,從而滿足該類實驗室對于檢測結果的要求:靈敏度更高、重複性更好、無需依賴标準曲線(xiàn)的絕對定量結果
9腫瘤治療的伴随診斷
常用(yòng)體(tǐ)液來源(如血液,胸腹水,唾液及尿液等) 的待檢标本中(zhōng)的DNA,有(yǒu)正常脫落體(tǐ)細胞和病變脫落細胞兩種來源,前者的量遠(yuǎn)大于後者。通過微液滴處理(lǐ)能(néng)在每個微液滴中(zhōng)有(yǒu)效減少正常體(tǐ)細胞DNA的幹擾,實現腫瘤标記物(wù)的有(yǒu)效檢測,如 EGFR, ALK, ROS1, KRAS、BRAF 等 基因的突變檢測、乳腺癌/胃癌的HER2基因擴增檢測等,應用(yòng)于腫瘤精(jīng)準醫(yī)學(xué)的伴随診斷
10移植排斥監控
接受肝髒移植的患者,目前用(yòng)于檢測器官排斥反應的常規方法是監測患者血液中(zhōng)的生化指标異常,一般情況下超過50%的移植器官功能(néng)已經喪失。新(xīn)的研究表明通過對七例術後移植患 者的移植物(wù)遊離DNA進行數字PCR檢測,更早發現了兩例發生排斥反應的患者,取得了令人 滿意的結果
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